关于动物血清的一些常见问题解答
在细胞培养中,血清是zui的重要组成部分。实验操作中应注意及处理要领:
生存血清:建议生存血清-5。℃至-2O℃。可是,如果存放在4℃不要凌驾一个月。如果一次不可用完一瓶,建议您将血清无菌分装到合适的灭菌容器中,然后放回冷冻。
解冻血清的要领:建议你把血清从冰箱里取出来,先放在2~8℃冰箱使之融化,然后在室温下使之完全融化。可是,须注意的是,在融化历程中务必有纪律地均匀摇晃。
血清解冻后发明絮状沉淀物泛起,该怎么办?
血清中沉淀物的原因有许多,但zui的常见原因是血清中脂卵白的变性,血纤维卵白(凝血卵白之一)在血清解冻后也保存于血清中,这也是沉淀物的主要原因之一。然而,这些絮状沉淀物不影响血清自己的质量。
如果你想去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装在无菌离心管内,400g稍微离心一点,上清液可以加入培养基一起过滤。我们不建议你通过过滤来去除这些絮状沉淀物,因为它们可能会阻塞你的过滤膜。
为什麽要热灭活血清?
加热可以灭活增补系统。激活增补剂加入溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。建议在免疫学研究中使用热灭活血清,培养ES细胞、昆虫细胞宁静滑肌细胞。
有须要做热灭活吗?
实验标明,关于大大都细胞来说,正确处理后的热灭活血清是不须要的。经过这种处理的血清只能稍微增进细胞的生长,或者完全没有效果,甚至血清质量通常受到高温处理的影响,导致细胞生长速度降低。然而,经过热处理的血清会明显增加沉淀物的形成。这些沉淀物在倒置显微镜下视察,如“小黑点”,往往会让研究人员误以为血清受到污染,将血清放在37处℃在情况中,这种沉淀物会增加,使研究人员误以为是微生物的破裂扩增。
所以我们建议你,如果没有须要,你就不需要做热处理了。这样,不但可以节省你名贵的时间,还可以包管血清的质量!
为什麽存放在冰箱里的胎牛血清会泛起沉淀?
胎儿血清未预老化,贮保存2-8℃其时,血清中的种种卵白质和脂卵白(如凝聚素、纤维卵白原、玻璃粘连卵白等)可能会聚集,形成沉淀或可见的污浊。这不应该影响血清质量。建议-20℃贮存胎牛血清,制止重复冻融。
怎样制止爆发沉淀物?
解冻血清时,请凭据建议的逐步解冻要领(-20)℃至4℃在室温下),如果血清解冻时温度变革过大(例如-20℃至37℃),实验标明,沉淀物很容易爆发。
解冻血清时,请随时摇匀,使温度和身分均匀,减少沉淀的爆发。
不要把血清放在37℃太久。若在37℃安排时间过长,血清就会变得污浊,血清中的许多不稳定身分也会受到损害,从而影响血清的质量。
血热灭活很容易导致沉淀物增多,如果没有须要,就不需要这样做了。
如果需要进行血清热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过长或摇晃不均匀,都会导致沉淀物增多。